일본 뇌염 (JE)는 JE 바이러스에 기인한 중요 한 신흥 신경학 상 질병입니다. 지금까지, TLR 분자 들이 제 진행에 미치는 영향은 해결 되지 않았다. 여기에서, 우리는 각 TLR이 여러 TLR 결핍 마우스 균 주 (TLR2, TLR3, TLR4, TLR7, TLR9)를 사용 하 여 JE를 변조 하는지 여부를 결정 했습니다. 놀랍게도, 테스트 된 TLR 결핍 마우스 중에는 TLR3-/-마우스, 즉 TLR3에 대 한 대조 결과가 있었다-/-생쥐 TLR4-/-생쥐가 je에 대 한 저항성을 향상 시켰다. TLR3 절제 유도 된 중증 CNS는 염증 성 CD11b + Ly-6Chigh 단 핵 세포의 조기 침 윤을 특징으로 하는 바이러스 성 부담, 프로 염증 성 사이토카인/케 모카 인 발현 뿐만 아니라 BBB 투과성. 대조적으로, TLR4-/-마우스는 감소 된 바이러스 부담, 백혈구 침투 및 염증 성 사이토카인 발현에 의해 나타나는 온화한 CNS 염증을 보였다. 흥미롭게도, TLR4 절제는 강력한 생체 내 조직 형 I IFN 선 천 적 반응 뿐만 아니라 항 바이러스 PRRs의 강한 유도와 관련 된 IFN 생산 (리그-I), 전사 인자 (IRF-3, IRF-7) 및 IFN 의존성 (파키스탄, Oas1 , Mx) 및 독립 ISGs (ISG49, ISG54, ISG56)를 통해 골수성 파생 DCs 및 대 식 세포에서 IRF3 및 NF-Κ b의 대체 활성화에 의해, 손상 된 유형을 통해 바이러스 복제에 더 관대 했다 TLR3-/-골수성 유래 세포에 비해 나는 IFN 타고 난 응답. TLR4 절제는 또한 선 천 적이 고 체액 성, CD4 + 및 CD8 + T 세포 반응을 IFN 강화 된 타입을 탑재 하는 것으로 나타났고,이는 변경 된 면역 세포 집단에 의해 중재 되었다 (DCs 및 NK 세포의 증가 된 수는 CD11b + 리-6 치의 단 핵 구 감소) 및 CD4 + 림프 조직에서 Foxp3 + Treg 번호. 따라서, 강력한 타입 I는 TLR4의 부재 하에서 선 천 적 및 적응형 면역 반응을 IFN 감소 된 제 치 사 성와 밀접 하 게 결합 시켰다. 집합적으로, 이러한 결과는 JE 진행 중에 바이러스 성 성분에의 한 TLR 신호 어레이의 균형 잡힌 트리거링은 부정적이 고 긍정적인 요인을 조절 함으로써 질병 결과를 결정 하는 일을 담당할 수 있음을 시사 한다.

바이러스 부담, 사이토카인 (IFN, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5 및 CXCL10) 및 체 모카 인 (IFN β) 및 림프 조직에서의 발현은 정량적 SYBR 그린 계 실시간 rt-pcr (실시간 qRT)를 실시 하 여 측정 하였다. "하는 것이 었습니다. 생쥐는 JEV (1.4 × 107 PFU)와 함께 복 강 내 (i.p.) 및 뇌, 척수 및 비장을 포함 한 조직을 감염 시켜 Hanks 평형 염 용액 (HBSS)과 함께 광범위 한 심장 관류 후 2, 3, 4 및 6 일 pi에서 수확 하였다. 이 지 블루를 이용 하 여 조직 으로부터 추출 된 총 RNAs (인 트 론, 대 전, 한국)는 CFX96 실시간 PCR 검출 시스템을 이용 하 여 실시간으로 qRT를 사용 하였다 (바이오 라 지 실험실, 헤라클레스, 캘리포니아). 고용량 cDNA 역 전사 키트 (응용 생물 시스템, 포스터, CA)와 총 RNAs의 역방향 전사를 포함 하는 반응 혼합물에는 µ의 템플릿 cDNA, 10µ의 2 × SYBR Primix Ex Taq 및 200 nM 프라이 머의 최종 부피 µ l. 반응은 95°c에서 30 초 동안 변성 되었고, 이어서 5s에 대해 95°c의 45 사이클을 실시 하 고, 20 초 동안 60°c를 하였다. 반응 주기가 완료 된 후 0.2°c/15 s의 속도로 65°c에서 95°c로 온도를 상승 시킨 후, 5 초 마다 형광을 측정 하 여 용융 곡선을 구성 하였다. 템플릿 DNA가 포함 되지 않은 대조 시료는 각 분석 법으로 실행 되었고, 모든 결정은 재현성을 보장 하기 위해 적어도 중복 하 여 수행 되었다. 증폭 된 산물의 신뢰성은 용융 곡선 분석에 의해 결정 되었다.

감염 된 샘플에서 바이러스 RNA의 상대적인 비율은 감염 되지 않은 샘플에서 결정 되었다. 모든 데이터는 바이오-Rad CFX 매니저, 버전 2.1 분석 소프트웨어 (바이오 Rad 실험실)를 사용 하 여 분석 하였다.